家人们，双荧光素酶真的有这么神奇吗？

想验证miRNA与靶基因的作用? ——双萤光素酶报告基因检测

想了解miRNA和lncRNA/circRNA的靶向互作?——双萤光素酶报告基因检测

想知道转录因子对下游基因的作用? ——双萤光素酶报告基因检测

没错，双萤光素酶体系就是这么的强大!

双荧光素酶报告基因通常以萤火虫荧光素酶为报告基因，以海肾荧光素酶为内参基因。所构成的报告系统具有检测迅速、灵敏度高、动态范围广、无细胞内源活性干扰等优势，广泛应用于基因调控、非编码RNA靶向互作等研究领域。今天，我们就来重点聊聊这个话题。

首先，带大家来了解一下荧光霉素的背景知识。

荧光素酶（Luciferase）自然界中能够产生生物荧光的酶的统称；通过氧化底物萤光素，产生荧光。

萤火虫荧光素酶来源于北美萤火虫。

海肾荧光素酶来源于海肾。

虽然荧火虫和海肾荧光素酶都具有具有完全不同的进化起源，因而其酶结构和底物要求完全不同。在ATP，镁，及氧存在时，萤火虫荧光素酶作用于甲虫荧光素，而海肾荧光素酶在氧的存在下作用于腔肠素。

双荧光素酶检测目的基因的转录调控作用的原理是什么呢？

将报告质粒与相应的质粒共同转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞。加入萤火虫荧光素酶检测试剂时产生萤火虫荧光信号，代表萤火虫荧光素酶报告基因(“实验”报告基因) 。

再加入海肾荧光素酶检测试剂，将上述反应淬灭，同时激活海肾荧光素酶的荧光反应 (“对照” 报告基因的活性) ，同时进行第二次测量。

通过荧光素酶活性的高低判断刺激前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的影响。

该试剂盒具有优势特点如下：

1. 检测迅速：从样本裂解到检测完成，只需10-15分钟；
2. 灵敏度高：基于化学发光法原理，通过萤光素酶和其底物这一生物发光体系，可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。
3. 检测范围广：对不同表达量的细胞样本均可以检测。
4. 无细胞内源活性干扰等特点。

小编经过沙里淘金，不断倾听用户的声音，为大家收集了一批双荧光素酶报告基因的常见问题，为后续实验打下坚实的基础。

Q1：请问该产品对酶标仪的灵敏度有要求吗？一般用辉光还是闪光？

A1：该产品对酶标仪的灵敏度没有要求，用的是辉光型。

Q2：加完萤火虫荧光试剂检测到值之后，海肾荧光素酶检测试剂加入到萤火虫检测试剂的孔里吗？还是将海肾荧光素酶检测试剂加入新的只加细胞裂解液的孔里呢?

A2：在同一个孔内检测，即先检测萤火虫荧光素酶活性，后检测海肾荧光素酶活性。

Q3：如果只想测海肾荧光素水平，裂解后能不能跳过荧光素酶的步骤直接加海肾荧光素酶工作液？

A3：可以的。

Q4：海肾萤光素酶检测底物的作用是什么？

A4：该底物的作用不但抑制萤火虫萤光素酶活性，还能检测海肾荧光素酶活性。

Q5：样品裂解后，加入96孔板中的步骤，需要在冰上操作吗？

A5：不需要在冰上操作的，建议常温操作即可。

Q6：Luminometer和荧光分光光度计有何不同？

A6：荧光分光光度计检测的样品本身不能发光，样品需要由特定波长的激发光激发，然后才能产生荧光并被荧光分光光度计检测。Luminometer检测的样品本身可以发光，不需要激发光进行激发。也就是说luminometer是检测化学发光(萤光)的仪器。 有些型号的荧光分光光度计也具有luminometer的功能，即也可以检测化学发光。您所使用的荧光分光光度计能否用于化学发光的测定请仔细阅读该仪器的说明书。

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