【干货分享】如何诱导巨噬细胞极化
巨噬细胞是机体内非常重要的一类免疫细胞，也一直是科研工作者们的研究热点，尤其是巨噬细胞的极化，本期我们将重点讲述如何诱导巨噬细胞极化。
当机体内环境稳态遭到破坏时，巨噬细胞通过吞噬、释放炎症因子等作用清除外源微生物，以恢复机体动态平衡，这个过程称为活化。伴随着活化，在细胞因子的作用下，巨噬细胞改变其表型，以增强应对微环境变化的能力，该过程为巨噬细胞的极化。
极化使得巨噬细胞向不同的方向分化，呈现出不同的表型，发挥不同的功能。目前巨噬细胞的极化包括两个极端，即经典活化的M1型巨噬细胞和替代性活化的M2型巨噬细胞。巨噬细胞的极化对防御病原体、调节炎症、修复组织和维持体内平衡的稳定有着十分重要的作用。
诱导巨噬细胞向M1型极化
所需诱导因子：IFN-γ、LPS、GM-CSF等
诱导巨噬细胞向M2型极化
所需诱导因子：IL-4、IL-13、IL-10、M-CSF、TGF-β等
以人外周血向巨噬细胞的极化为例
单核细胞样本准备
从外周血中分离PBMCs，可使用人淋巴细胞分离液进行此步；
从PBMCs中分离单核细胞，可使用CD14单核细胞磁珠分选试剂盒进行此步。
获得成熟巨噬细胞
调整单核细胞浓度为1-2×10^6/ml（可参考文献），在RPMI1640培养基（含20 % FBS）中添加M-CSF（100 ng/ml）诱导单核细胞向巨噬细胞的成熟。
7天左右分化成熟为巨噬细胞（贴壁），可选择CD68+表达作为鉴定巨噬细胞成熟的标志蛋白。
图1. 诱导单核细胞向巨噬细胞的成熟
诱导向不同方向的极化
将成熟的巨噬细胞消化下来，重新铺板，诱导48h实现向M1、M2的极化：
M1极化因子：LPS（100 ng/ml）+ IFN-γ（20 ng/ml）
M2极化因子：IL-4或IL-10或IL-13（20 ng/ml）
图2. 诱导成熟巨噬细胞向M1、M2的极化
极化的鉴定
刺激48小时后，用流式的方法检测极化后M1、M2标志蛋白的表达。M1巨噬细胞上调表达CD86、MHCⅡ、CD80、CD274等，M2巨噬细胞上调表达CD206、CD163等。
参考文献
Blood. 2013 Dec 12;122(25):4054-67. doi: 10.1182/blood-2013-05-501494. Epub 2013 Oct 30
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