生化检测样本处理老出问题？样品不显色怎么办？生化检测FAQ大合集，以下盘点了生化检测常见问题，生化检测不再捣蛋

1. 是否可以检测冻存的样本？

答：通常新鲜样本和冻存样本都可用于大多数生化指标的测定，但最好还是采用新鲜样本，因为根据指标的不同，样本的冻存对结果的影响也不同。一般情况下，随着冻存时间的延长，样本的酶活力会逐渐下降，甚至会完全失活。而某些指标中，冻存样本的检测结果会比新鲜样本检测结果高，如血氨。

组织匀浆样本最好当天检测，若不能当天检测，推荐直接冻存组织，而不是组织匀浆。

样本切忌反复冻融，建议收集样本之后，分装冻存，避免样本反复冻融。

2. 生化酶标板可以用普通板子替代吗？

答：常规可见光检测样本可以用实验室中普通的96孔板代替，室温放置即可，避免污染；

注：荧光法使用的全黑96孔板和紫外专用96孔UV板是专用且不可拆卸的，也不能用普通的96孔板代替。

3. 样本如何稀释或者浓缩？

答：样本测定值若超出检测范围，可以将样本用生理盐水、PBS或指定的稀释液稀释后重新测定。一般稀释倍数从小到大，按照2倍，5倍，10倍，20倍…的顺序稀释，然后预实验确定一个合适的稀释倍数；

样本测定值若低于检测范围，蛋白样本可以使用超滤管进行浓缩，其他样本可使用冷冻真空浓缩仪提高样本浓度后再进行测定。

4. 如何进行样本匀浆呢？

答：手工匀浆：将含匀浆介质的样本倒入玻璃匀浆管中，上下转动研磨数十次（6-8分钟），使组织匀浆化。

机械匀浆：用组织匀浆机，在冰水浴条件下研磨制成组织匀浆，皮肤、肌肉组织及植物组织等可适当延长匀浆时间。

超声破碎：用超声粉碎机进行粉碎，可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14 um超声处理30秒使细胞破碎；也可用国产超声波发生仪，用40A，5 s/次，间隙10 s反复3-5次。

反复冻融：适用于细胞样本，即用低渗液或双蒸水重悬细胞，再将细胞悬液进行“低温冷冻-室温融化-低温冷冻”循环，重复3次左右。

5. 标准品或样品不显色？如何解决？

答：样本中确实不含有该指标或者指标含量太低，可查阅相关文献确定该样本中是否含有待检测指标；

样本保存不当，导致样本失活或提取方法不当未成功提取待检测物质等，建议尽可能使用新鲜样本以达到最佳实验效果，或者-80度保存；

样本前处理不当使用了导致酶失活的化学试剂等，例如：贴壁细胞不能进行胰酶消化，可能导致待测定目标酶活性受到影响，可采用直接刮取的方法；

试剂保存不当，包括保存温度、放置太久过期等，导致试剂盒中某些试剂失效。根据说明书建议给予产品最佳保存条件，Abbkine产品可保质一年。

6. 检测数据与文献报道或者实验室此前测定数据结果差异大？

答：样品本身的影响：同一指标在不同样品，同一样品不同发育阶段或者不同环境下，其浓度或酶活会发生非常大的变化；

测定方法的影响：同一指标因为测定方法不同，检测结果会出现较大的差异，与文献对比时，应注意文献的检测方法、培养和处理条件及计算公式、单位、单位的定义等；

操作和仪器设备的影响：操作者取样习惯、匀浆程度和外部检测环境等都会对检测结果有很大影响。不同仪器设备的检测限和稳定性也会有一定影响；

与其他文献检测结果比较时，应比较实验组与对照组的数据差异性和变化趋势，而不是检测结果的数值。

7. 为什么同一样本平行测定结果差异大（复孔差异大）？

答：样本原因：样本体系不均匀、样本提取时离心不完全、杂质等原因；

仪器原因：仪器不稳定造成系统误差大，一般仪器需要预热30分钟后再进行比色检测；

操作原因：由于操作不熟练，加样和加液手法问题，造成平行结果差异大。

8. 要不要做标曲？试剂盒中有要求需要做标曲的，能否不做标曲直接采用说明书上的？标曲不过原点怎么办？

答：不可以自己不做标曲就直接用说明书上的标曲计算样本值，因为实验室的环境、仪器设备、实验人员、操作手法都不一样，需要自行做标曲。

所做的标曲跟说明书上的不太一样，标曲不过原点，主要是在做标曲时，没有用浓度与绝对OD值作图导致的。绝对OD值是用不同浓度标准品的OD值减去浓度为0的标准品OD值。

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