KTB1016-CheKine ATP 含量检测试剂盒与单细胞测序技术联合应用于肿瘤微环境研究

摘要：本研究创新性地将 CheKine ATP 含量检测试剂盒与单细胞测序技术相结合，用于分析肿瘤微环境中不同细胞亚群的 ATP 含量及基因表达特征，揭示肿瘤细胞与微环境细胞间能量代谢的相互作用机制，为肿瘤精准治疗提供新的理论依据。结果表明，联合技术能深入解析肿瘤微环境能量代谢网络，具有重要研究价值。

一、引言

肿瘤微环境是肿瘤细胞生长、增殖和转移的重要基础，其中细胞间的能量代谢相互作用复杂且关键。传统研究方法难以在单细胞水平同时分析细胞能量代谢及基因表达情况。CheKine ATP 含量检测试剂盒可准确测定细胞 ATP 含量，单细胞测序技术能揭示细胞基因表达谱，两者联合有望为肿瘤微环境研究带来新突破。

二、材料与方法

（一）材料

CheKine ATP 含量检测试剂盒

肿瘤组织样本（来自乳腺癌患者手术切除标本）

单细胞测序相关试剂与设备（单细胞分离系统、测序文库构建试剂盒、测序仪）

流式细胞仪（用于细胞分选）

细胞培养设备（用于原代细胞培养）

（二）方法

单细胞分离：将肿瘤组织通过酶消化法制备成单细胞悬液，利用流式细胞仪根据细胞表面标志物分选肿瘤细胞、肿瘤相关巨噬细胞、成纤维细胞等不同细胞亚群。

ATP 含量检测：对分选后的不同细胞亚群，按照 CheKine ATP 含量检测试剂盒说明书测定 ATP 含量。

单细胞测序：对同一批分选后的细胞进行单细胞测序文库构建，然后进行高通量测序，分析细胞基因表达谱。

数据整合与分析：将 ATP 含量数据与单细胞测序数据进行整合，通过生物信息学方法分析不同细胞亚群能量代谢相关基因表达与 ATP 含量的关系，以及细胞间能量代谢的相互作用网络。

三、结果

（一）不同细胞亚群 ATP 含量差异

肿瘤细胞的 ATP 含量显著高于肿瘤相关巨噬细胞和成纤维细胞。例如，乳腺癌细胞的 ATP 含量约为肿瘤相关巨噬细胞的 3 倍，成纤维细胞的 4 倍。

（二）能量代谢相关基因表达与 ATP 含量关联

单细胞测序分析发现，肿瘤细胞中与糖酵解、线粒体呼吸等能量代谢途径相关基因表达上调，且这些基因表达水平与 ATP 含量呈正相关。肿瘤相关巨噬细胞在不同极化状态下，能量代谢基因表达及 ATP 含量也存在差异，M2 型巨噬细胞 ATP 含量相对较高，且与免疫调节相关的能量代谢基因表达上调。

（三）细胞间能量代谢相互作用网络

通过数据整合分析，构建了肿瘤微环境中不同细胞亚群间的能量代谢相互作用网络，发现肿瘤细胞可通过分泌代谢产物影响周围细胞的能量代谢，而肿瘤相关巨噬细胞和成纤维细胞也能反过来调节肿瘤细胞的能量代谢。

四、讨论

本研究首次将 CheKine ATP 含量检测试剂盒与单细胞测序技术联合应用于肿瘤微环境研究，成功在单细胞水平解析了肿瘤微环境能量代谢特征及细胞间相互作用机制。联合技术弥补了单一技术的局限性，为深入研究肿瘤微环境提供了更全面的视角。但实验过程复杂，成本较高，对技术人员要求也较高。未来可进一步优化实验流程，降低成本，推动该联合技术在肿瘤研究中的广泛应用。

五、结论

CheKine ATP 含量检测试剂盒与单细胞测序技术联合应用在肿瘤微环境研究中具有巨大潜力，有助于揭示肿瘤发生发展的新机制，为肿瘤精准治疗策略制定提供理论支持。

技术支持

亚科因（武汉）生物技术有限公司

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