KTB1910-CheKine™ 活性氧（ROS）含量检测试剂盒（荧光法）在心血管疾病急性发作期氧化应激变化研究中的应用​

摘要：本研究运用 CheKine™ 活性氧（ROS）含量检测试剂盒（荧光法），系统检测心血管疾病急性发作期（如急性心肌梗死、急性脑卒中等）患者及动物模型体内活性氧水平的动态变化，分析 ROS 与心血管疾病急性损伤的关系，为揭示心血管疾病急性发作的氧化应激机制及寻找潜在干预靶点提供实验依据。结果显示，该试剂盒能够准确且灵敏地监测心血管疾病急性发作期的 ROS 含量变化，为心血管疾病研究提供了新的关键数据。​

一、引言​

心血管疾病急性发作往往导致严重的组织损伤和不良预后，如急性心肌梗死可引发心肌细胞大量坏死，急性脑卒中可造成脑组织缺血缺氧性损伤。氧化应激在心血管疾病急性发作过程中扮演着至关重要的角色，活性氧的大量产生可加剧炎症反应、损伤血管内皮细胞、促进血栓形成，进而加重心血管组织损伤。准确测定心血管疾病急性发作期的 ROS 含量，对于深入理解疾病的急性损伤机制及开发有效的早期干预措施具有不可忽视的意义。CheKine™ 活性氧（ROS）含量检测试剂盒（荧光法）凭借其高灵敏度和特异性的荧光检测技术，为心血管疾病急性发作期氧化应激研究提供了有力工具。​

二、材料与方法​

（一）材料​

CheKine™ 活性氧（ROS）含量检测试剂盒（荧光法）​

实验动物（SD 大鼠用于构建急性心肌梗死模型，通过冠状动脉结扎；小鼠用于构建急性脑缺血模型，采用线栓法阻断大脑中动脉）​

心血管疾病急性发作期患者血液及组织样本（经伦理委员会批准，并获得患者知情同意）​

荧光显微镜、流式细胞仪、酶标仪​

动物手术器械、组织匀浆器、离心机等样本处理设备​

实时荧光定量 PCR 仪、Western blot 设备（用于检测相关基因和蛋白表达）​

（二）方法​

动物实验​

模型构建：按照既定方法成功构建急性心肌梗死和急性脑缺血动物模型，通过心电图、神经功能评分等指标确认模型有效性。​

ROS 含量检测：在急性发作后的不同时间点（如急性心肌梗死模型在结扎后 0.5 小时、1 小时、3 小时、6 小时、12 小时、24 小时；急性脑缺血模型在再灌注后 1 小时、3 小时、6 小时、12 小时、24 小时），迅速处死动物，分别取心脏梗死区及周边组织、脑缺血半暗带及正常脑组织。制备组织匀浆或切片，按照试剂盒说明书加载荧光探针，利用荧光显微镜观察 ROS 在组织中的分布，通过酶标仪定量检测组织匀浆中的 ROS 含量。​

相关指标检测：采用实时荧光定量 PCR 和 Western blot 技术，检测组织中氧化应激相关基因（如 Nrf2、HO - 1 等）和蛋白（如 SOD、CAT 等抗氧化酶，以及炎症因子如 TNF - α、IL - 6 等）的表达变化，与 ROS 含量进行相关性分析。​

临床研究​

样本采集：收集急性心肌梗死和急性脑卒中患者发病后不同时间点（0 - 6 小时、6 - 12 小时、12 - 24 小时）的外周静脉血和脑脊液（对于脑卒中患者）样本。同时，选取年龄、性别匹配的健康志愿者作为对照。​

ROS 含量检测：对血液和脑脊液样本进行处理，加载荧光探针，利用流式细胞仪检测血细胞内 ROS 含量，酶标仪检测脑脊液中的 ROS 含量。​

临床指标关联分析：将 ROS 含量与患者的临床指标（如心肌梗死患者的心肌损伤标志物肌钙蛋白 I、脑钠肽水平，脑卒中患者的神经功能缺损评分、梗死灶面积等）进行相关性分析，评估 ROS 在心血管疾病急性发作期病情评估中的潜在价值。​

三、结果​

（一）动物实验结果​

ROS 含量变化：在急性心肌梗死模型中，心脏梗死区组织 ROS 含量在结扎后 0.5 小时即显著升高，1 小时达到峰值，为正常组织的 8 倍左右，随后逐渐下降，但在 24 小时仍维持在较高水平。在急性脑缺血模型中，脑缺血半暗带组织 ROS 含量在再灌注后 1 小时开始升高，6 小时达到高峰，为正常脑组织的 6 倍左右，之后缓慢降低。​

相关性分析：ROS 含量升高与氧化应激相关基因和蛋白表达变化密切相关。在急性心肌梗死组织中，Nrf2、HO - 1 等抗氧化基因表达初期上调，但随着 ROS 持续升高逐渐受到抑制，SOD、CAT 等抗氧化酶活性先升后降，而 TNF - α、IL - 6 等炎症因子表达显著增加，与 ROS 含量呈正相关。在急性脑缺血组织中也观察到类似趋势。​

（二）临床研究结果​

ROS 含量变化：急性心肌梗死和急性脑卒中患者外周血和脑脊液中的 ROS 含量在发病后迅速升高。急性心肌梗死患者发病 0 - 6 小时外周血 ROS 含量较健康对照组增加约 3 倍，急性脑卒中患者脑脊液 ROS 含量在发病 6 - 12 小时达到高峰，为对照组的 4 倍左右。​

临床指标关联：ROS 含量与患者的临床指标显著相关。急性心肌梗死患者外周血 ROS 含量与肌钙蛋白 I、脑钠肽水平呈正相关，ROS 含量越高，心肌损伤越严重。急性脑卒中患者脑脊液 ROS 含量与神经功能缺损评分、梗死灶面积呈正相关，反映 ROS 参与了脑卒中患者的病情进展。​

四、讨论​

本研究利用 CheKine™ 活性氧（ROS）含量检测试剂盒（荧光法）成功揭示了心血管疾病急性发作期体内 ROS 含量的动态变化规律及其与氧化应激损伤、临床病情的关系。该试剂盒在动物和临床样本检测中均表现出良好的稳定性和准确性，能够直观且定量地反映心血管疾病急性发作期的氧化应激状态。然而，在实验过程中，动物模型的个体差异、临床样本采集的时间窗控制以及样本处理过程中的 ROS 稳定性等因素，可能对结果产生一定影响，需要在后续研究中进一步优化实验方案。结合基因和蛋白表达检测以及临床指标分析，从多维度深入解析了心血管疾病急性发作的氧化应激机制，为早期干预治疗提供了理论基础。未来可基于该研究结果，探索针对心血管疾病急性发作期氧化应激的靶向干预措施，如开发特异性抗氧化药物或调节氧化应激相关信号通路的药物，通过临床试验验证其有效性，有望改善心血管疾病急性发作患者的预后。

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五、结论​

CheKine™ 活性氧（ROS）含量检测试剂盒（荧光法）在心血管疾病急性发作期氧化应激变化研究中具有重要应用价值，有助于深入理解心血管疾病急性损伤机制，为心血管疾病的防治研究提供了新的思路和关键技术手段。

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