商品信息

产品英文名称	CheKine™ Micro Acetyl Coenzyme A (Acetyl-CoA) Assay Kit
产品中文名称	CheKine™ 乙酰辅酶A（Acetyl-CoA）含量检测试剂盒（微量法）
别名	乙酰辅酶A,Acetyl-CoA

商品属性

检测方法	比色法
试剂盒组分	• Extraction Buffer • ReagentⅠ • Reagent Ⅱ • Reagent Ⅲ • Reagent Ⅳ • Standard
特点&优势	• 简单、快速、灵敏的比色法 • 动、植物组织和细胞等样本 • 提供了详细的样品制备和结果计算方法 。
使用中注意事项	• 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。 • 混合或复溶组分时，避免产生气泡。 • 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。 • 实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 • 测定过程中样本和所有试剂在冰上放置，以免变性和失活。 • 尽量用新鲜样本提取乙酰辅酶A，以保证酶的活力。 • 如果吸光度太高，可以减少组织质量，如果吸光度太低，可以减少Extraction Buffer体积。
保存建议	收到货后，请避光保存于-20℃。请参阅说明书中各个组件的存储条件，自发货之日起，按照推荐的保存条件，有效期为6个月。
运输条件	蓝冰运输
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

附加信息

背景	乙酰辅酶A (Acetyl-CoA) 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。是生物体能源物质代谢过程中产生的一种重要的中间代谢产物。在体内能源物质代谢中是一个枢纽性的物质。糖、脂肪、蛋白质三大营养物质通过乙酰辅酶A汇聚成一条共同的代谢通路-三羧酸循环和氧化磷酸化，经过这条通路彻底氧化生成二氧化碳和水，释放能量用于ATP合成。此外，乙酰辅酶A是合成脂肪酸，酮体，胆固醇及其衍生物等生理活性物质的前体物质。

图片及说明

样本制备
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存 1 个月。如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine 货号：KTD3002的蛋白质定量试剂盒（Bradford 法）进行样本蛋白质浓度测定。
1. 细胞样本：收集细胞样本到离心管内，弃上清，按照每 500 万细胞加入 1 mL Extraction Buffer，超声破碎细胞（功率 20%，超声 3 s，间隔 10 s，重复 30 次），13,000 g，4℃离心 10 min，取上清，置冰上待测。
2. 组织样本：称取 0.1 g 组织，加入 1 mL Extraction Buffer，进行冰浴匀浆，13,000 g，4℃离心 10 min，取上清，置冰上待测。
实验步骤
1. 酶标仪或紫外分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 340 nm，紫外分光光度计用去离子水调零
3/4 2. 工作液于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）孵育 10 min。
3. 操作表：在 96 孔 UV 板或微量石英比色皿中，按照下表进行
4. 混匀，测定孔立即读取 340 nm 处 20 秒的吸光值 A1 和 1 分 20 秒时的吸光值 A2，计算ΔA 测定=A2-A1，标准孔读取 340 nm 处 1分 20 秒时的吸光值 A 标准，ΔA 标准=A 标准-A 空白。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果吸光度大于 1.5，可以减少样本量，如果吸光度太低，可以减少 Extraction Buffer 体积。
结果计算
注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
以ΔA 标准为 x 轴，标准品浓度为 y 轴，制作标准曲线，得到方程，将ΔA 测定带入方程，得到 y 值。
1. 按样本蛋白浓度计算：乙酰辅酶 A 含量(nmol/mg prot)=(y×V 样)÷(V 样×Cpr)=y÷Cpr
2. 按样本鲜重计算：乙酰辅酶 A 含量(nmol/g 鲜重)=(y×V 样)÷(W×V 样÷V 提取)=y÷W
3. 按细胞密度计算：乙酰辅酶 A 含量(nmol/104 cells)=(y×V 样)÷(500×V 样÷V 提取)=y÷500
V 样：加入样本体积，0.025 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；V 提取：加入提取液体积，1 mL；500：细胞总数，500 万。

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