加入收藏 欢迎光临Abbkine Scientific Co., Ltd官方网站全国服务热线:400-6800-830
登录 注册
中文

亚科因(Abbkine)—服务于细胞和蛋白研究全球用户

SuperKine™ 超敏型细胞增殖检测试剂(CCK-8)

SuperKine™ Maximum Sensitivity Cell Counting Kit-8 (CCK-8)

浏览次数(15484) 文献引用(1) 货号(BMU106)
SuperKine™ Maximum Sensitivity Cell Counting Kit-8 (CCK-8)
  • 产品概述
  • 使用说明
  • FAQ
  • 文献引用(1)
  • 相关产品

商品信息

产品英文名称 SuperKine™ Maximum Sensitivity Cell Counting Kit-8 (CCK-8)
产品中文名称 SuperKine™ 超敏型细胞增殖检测试剂(CCK-8)
别名 CCK-8法; 四唑盐WST-8;

商品属性

试剂盒组分即用型CCK-8溶液
特点&优势•灵敏度高:检测结果更准确
•稳定性好:可-20℃避光冷藏保存2年以上
•安全性高:对细胞毒性较小,对后续实验几乎无影响
产品形式液体形式
保存建议4℃,避光保存12个月,-20℃至少24个月
运输条件蓝冰运输
警告本文列出的产品仅供研究使用,不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用,不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为,我们不承担任何责任。

附加信息

背景CCK-8法是基于高度水溶性的四唑盐WST-8来进行测定细胞增殖/毒性的。WST-8在电子介体的作用下可还原生成水溶性甲瓒产物,产生颜色反应。细胞中脱氢酶产生的甲瓒产物的量与活细胞的数量成正比。

图片及说明

Fig.1 Comparison between SuperKine™ Maximum Sensitivity Cell Counting Kit-8 (CCK-8) (Cat # : BMU106-CN) and three international brands A, B and C in the detection of HEK293 cells with different number of living cells was performed. The results showed that the SuperKine™ Maximum Sensitivity Cell Counting Kit-8 (CCK-8) had the best sensitivity.

Fig.1 Comparison between SuperKine™ Maximum Sensitivity Cell Counting Kit-8 (CCK-8) (Cat # : BMU106-CN) and three international brands A, B and C in the detection of HEK293 cells with different number of living cells was performed. The results showed that the SuperKine™ Maximum Sensitivity Cell Counting Kit-8 (CCK-8) had the best sensitivity.

使用说明
  • 说明书上仅写了96孔板的测定方法,如果使用24孔板货12孔板,应该加多少量CCK-8试剂?

    一般情况下建议加入CCK-8试剂的量是培养基体积的1/10。

  • 在实验中吸光度值太高,如果不能减少细胞数量,如何解决?

    可以缩短加入CCK8后的培养时间。例如:可以把加入CCK8试剂后的培养时间由2小时缩短为1小时。

  • 应该每次做标准曲线吗?

    建议每次做。虽然细胞是一样的,但是细胞的状态不一定一样,对于状态不一样的细胞,建议每次做标准曲线。如果试剂的批号不一样,灵敏度可能会有轻微的差异,对于不同的批号建议分别做标准曲线。

  • 如遇到每次测定的数值不一样,是什么原因?如何解决?

    可能会有以下几个原因: 1. 当在培养箱内培养时,培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发,由于体积不准确而增加误差。 一般情况下,最外一圈的孔只加培养基,不作为测定孔用。 2. 有可能会因为CCK8沾在壁上而产生误差,建议在加入CCK8后,轻轻敲击培养板以帮助混匀。 3. 每孔的细胞数量过多或过少。请预先在1,000-100,000个/孔范围内摸索条件。

  • 在CCK-8显色过程中,如何终止反应?

    有以下几种方法(96孔板): 1、 在显色反应后,将培养板放置4℃冰箱内。 2、 每孔加10 μl 0.1 M HCL溶液。 3、 每孔加10 μl 1%(w/v)的SDS(十二烷基硫酸钠)溶液。注意:反应停止后,应在24小时之内测定。

  • 如果加入的药物中含有金属,是否会有影响?

    金属对CCK-8显色有影响。当终浓度为1 Mm的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制5%、15%、90%的显色反应,使灵敏度降级。如果终浓度是10 Mm的话,将会100%抑制。

  • 预培养后,更换培养基需要细胞计数吗?

    一般情况下用胰蛋白酶处理对数增长期的细胞,用血球计数盘计数,制备成一定浓度的细胞悬液即可。如果想要精密计数细胞的话,可以预培养后取培养基用血球计数盘进行计数。

  • 有时在药物作用情况下,细胞已经死亡,但是脱氢酶的活性还在,是否能计算细胞数量?

    不能。由于CCK-8是通过和细胞内的脱氢酶进行反应间接反映活细胞数量,如果细胞已经死亡,但脱氢酶的活性还在,则试剂测定的细胞数量将会比真实值高,不能真实反映活细胞数量,建议采用别的方法测定。

  • 在做加药实验时,药物对测定是否有影响?如何解决?

    有时会有影响。如果药物具有还原性,会和CCK8发生显色反应,增加吸光度。解决办法:首先要确认药物是否有吸收,在含有药物的培养基中加入CCK8,测定450 nm的吸光度,如果它的吸光度比不含药物的培养基 (加CCK8)的吸光度高,则证明药物有影响,可在加CCK8之前更换培养基,去掉药物的影响。

  • CCK-8对于不同的细胞,灵敏度是否一样?

    不一样,悬浮细胞与贴壁细胞相比较难染色。对于贴壁细胞,一般加入CCK-8培养1-4小时吸光度已经很高,但对于悬浮细胞则可能吸光度较低,可以通过延长CCK-8的加入时间或增加细胞数量来解决。

  • 哪些物质会影响CCK8的测定?

    当有还原性物质存在时会影响CCK8的测定,例如含有维生素C的Glucose等 (一般培养基中的量不多,酚红或血清不影响测定)。在有酚红存在的情况下,会增加空白吸收,但不影响测定,扣除空白吸收即可。

  • 必须预培养细胞吗?

    不一定。如果要向保持细胞的最好状态,建议预培养细胞。如果不做细胞预培养,细胞内的脱氢酶可能会不稳定。也有人不做细胞预培养,但在做标准曲线和检测时需要统一检测条件。

  • CCK8检测溶液对细胞是否有毒?

    加到培养基中的CCK8是没有毒性的,长时间的培养,如过夜或者培养数天是可以的。同一个细胞培养液在CCK8检测后还可以用于其他细胞增殖检测,如结晶紫检测,中性红检测或者DNA荧光检测等。由于每种细胞对于CCK8的耐受力都不同,因此在需要进行长时间培养时,先检测一下细胞在加入CCK8培养后的活力。

  • 实验之前,是否需要先检测一下培养基和CCK-8是否会反应?

    建议使用一个孔作一下检测,因为有培养基中可能含有氧化还原反应的物质,在正式实验之前有必要先确认培养基和CCK-8是否反应。一般正常在的OD值应该在0.4以下。

  • 设定参比波长的目的是什么?必须设定吗?

    不一定要设定。CCK-8试剂在参比波长没有吸光度。设定参比波长的目的是为了取出由于样品混浊所带来的吸收。

  • CCK-8试剂的保存条件?

    在避光0-5℃条件下可以保存1年。

  • 如何设定空白对照?

    在不含细胞的培养基中加入CCK8,培养一定的时间,测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验(细胞毒性实验)时,还应考虑药物的吸收,可在不含细胞,加入药物的培养基中加入CCK8,培养一定的时间,测定450 nm的吸光度作为空白对照。

  • 悬浮细胞和贴壁细胞在数量上有何区别?

    悬浮细胞由于染色比较困难,一般需要增加细胞数量和延长培养时间。贴壁细胞染色比较容易,若细胞数量过大,有时吸光度会超过酶标仪的读数。

  • CCK8能否对活细胞进行染色?

    不能。因为CCK8的主要成分是一种水溶性的四唑盐 (WST-8),并通过电子载体1-Methoxy PMS将活细胞中的电子交换到培养基中的WST-8上。由于生成的甲瓒也是高度水溶性的,因此CCK8不能对细胞进行染色。

本产品已在(1)种出版物中被引用

意见反馈
在线咨询
扫码关注

微信公众号

返回顶部