产品英文名称 | ExKine™ Nuclei Extraction Kit (High Purity) |
产品中文名称 | ExKine™ 细胞核分离提取试剂盒(高纯度) |
试剂盒组分 | • 裂解缓冲液 • 1.8M 蔗糖垫层 • 蔗糖稀释液 • 细胞核保存缓冲液 |
特点&优势 | • 从哺乳动物细胞和组织中,快速分离提取纯的脆弱的细胞核 • 通过稠密的蔗糖垫层进行超速离心,以保护细胞核并去除细胞膜和细胞质污染物。 |
使用中注意事项 | 所有实验步骤请在2-8°C下执行。使用预冷的缓冲液和设备,并确保所有溶液都是解冻和均匀的。 |
保存建议 | 请参阅说明书中各个组分的存储条件。自发货之日起,在推荐温度下至少稳定12个月。 |
运输条件 | 蓝冰运输 |
警告 | 本文列出的产品仅供研究使用,不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用,不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为,我们不承担任何责任。 |
背景 | 从细胞核制备提取物通常是许多细胞生物学研究的第一步,例如体外细胞凋亡,细胞转录状态检测和核组分来源(染色质,基因组DNA,组蛋白和核RNA / RNP)。 |
Fig. ExKine™ Nuclei Extraction Kit (High Purity)
该试剂盒提取的细胞核保持了良好的形态和功能,可以用于进一步的细胞核RNA的提取蛋白用。
需要将细胞核吹打均匀,借助血细胞计数板或者流式细胞仪进行定量。
该试剂盒是细胞核精提试剂盒,是用物理方法进行的分离,所以不会破坏细胞核的完整性。
该试剂盒提取的细胞核形态完整,功能活性不会发生改变。不适用于Hi-C实验,染色质构象捕获技术需要先固定细胞,保持细胞核形态再进行染色。
可剪去枪头的尖端,吹打过程需动作轻柔。
建议客户操作手法要轻柔慢吸,先用大吸头吸上层的溶液,再用小吸头吸取靠近沉淀的溶液,如果可以反复重悬离心几次;
超声可能会破坏细胞核内的成分,为了确保您的RNA完整性,建议您用匀浆器进行匀浆,该方法既能保证质量而且成本低。
核定量前处理:将细胞核吹打均匀,取少量悬液借助血细胞计数板或者流式细胞仪进行定量; WB实验前处理:用温和RIPA裂解液将细胞核裂解,然后按照WB实验正规操作进行。
将提取出来线粒体沉淀,不加保存液,最好用Bradford法测定线粒体浓度,对比Bradford法 (考马斯亮蓝)和BCA法,两者都有干扰物质,但相比之下Bradford法的干扰物质影响更小一点。建议用条件温和的细胞裂液进行线粒体的匀浆,并进行检查。
提取步骤完成之后,先离心去除上清液,用条件温和的裂解液RIPA来裂解沉淀中的细胞核,再进行蛋白定量上样即可。
从细胞核制备提取物通常是许多细胞生物学研究的第一步,例如体外细胞凋亡,细胞转录状态检测和核组分来源(染色质,基因组DNA,组蛋白和核RNA / RNP)。
在分离去除上层溶液过程中,操作需轻柔,最后用小规格的枪头进行移液,如果对细胞核纯度要求比较高,可以进行二次离心分离。如有疑问,请联系support@abbkine.com。
作者:Meng, Bosu, et al. 杂志名称:Journal of Analytical Methods in Chemistry IF:3